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国家自然基金标书:用慢病毒RNA干扰系统研究精子发生相关基因znf230的功能

来源:基因时代 作者:无城 人气: 发布时间:2010-10-24
摘要:摘要: 项目研究内容和意义简介 (限 400 字) : RNA 干扰( RNA interference,RNAi )是由双链 RNA 介导的序列特异性的 mRNA 降解所致的转录后基因沉默过程。 RNAi 技术可方便快捷地研究基因的功能,并用于功能基因的筛

 

摘要:

项目研究内容和意义简介(限400字) RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的序列特异性的mRNA降解所致的转录后基因沉默过程。RNAi技术可方便快捷地研究基因的功能,并用于功能基因的筛选。本课题拟采用RNAi及胚胎干细胞体外定向分化技术,将我室新克隆的精子发生相关基因znf230siRNA通过慢病毒(Lentivirus)系统引入小鼠胚胎干细胞,体外模拟精子发生过程,而在细胞水平上研究znf230基因表达受抑后对生精的影响,同时结合基因表达谱芯片及蛋白组二维电泳-质谱技术实现基因功能性及蛋白质表达筛查,以期全面研究该基因的功能。上述技术平台的建立将提供一个精子发生相关基因功能研究的模型,亦为RNAi技术的应用研究拓展了新的思路。这一设想尚未见文献报道,如能证明其合理有效,将成为难于鉴定表型且异常表达的基因功能研究的通用模型,并在后续蛋白组学及基因相关药物的研发中发挥重要作用。

 

报告正文

 


(一)立项依据与研究内容4000-8000字):

1. 项目的立项依据附主要的参考文献目录

人类基因图谱解码已经完成。进入功能基因组学时代后,疾病相关基因以及重要功能基因的分离、定位、克隆表达已日益加速。而随着新基因的分离与鉴定,对这些基因的功能进行系统的研究将成为这一时期的主要任务。因此,建立或开发新的或实用的基因功能研究技术平台具有重要意义。

 

在功能基因组研究中,酵母杂交系统、DNA芯片、反义RNA、基因敲除(gene knock-out)等技术为解读基因功能提供了有效的手段。其中基因敲除虽是基因功能研究的经典技术[1],但由于外源及靶DNA发生同源重组的几率极低,重组体的筛选及检测即成为该技术的瓶颈,难以适应大规模的基因功能研究。近年来发展起来的RNA干扰(RNA interferenceRNAi)技术作为特异性抑制基因表达的方法,已成为生命科学领域研究的热点。其优点是可以简便地制备特定基因缺失表型的个体,较快捷地研究目的基因的功能,并使系统性、高通量功能基因筛选成为可能。

 

作者:无城

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