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RNA Markers的使用方法(适用于RNA Marker RL1,000、RL6,000、RL10,000)

来源:未知 作者:编辑 人气: 发布时间:2016-10-06
摘要:RNAmarker( RL1,000; RL6,000; RL10,000) 可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。 以RL10,000为例,具体使用方法如下: 普通琼脂糖凝胶电泳时 1.按下列组份配置RNAMarker样品。 3.均匀混合后,70℃加热5分钟,迅速冷却至室温(最好用PCR仪)。 4.

RNA marker ( RL1,000; RL6,000; RL10,000) 

可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。

以RL10,000为例,具体使用方法如下:

普通琼脂糖凝胶电泳时

1.按下列组份配置RNA Marker样品。


3.均匀混合后,70℃加热5分钟,迅速冷却至室温(最好用PCR仪)。
4.甲醛变性琼脂糖凝胶配制如下*:制胶时加3 g高质量的琼脂糖到93 mlDEPC水中,另加30 ml 5×MOPS-EDTA。煮沸直至完全溶解。加入DEPC水定容至123 ml。让溶液冷却至60℃左右后,加入27 ml 37%甲醛(在通风橱中操作)倒胶后于室温静置1小时。
5.加样前将胶在1×MOPS-EDTA中预电泳30分钟。
6.混匀电泳槽中的1×MOPS-EDTA Buffer(电泳液),加入上述操作2配制的RNA Marker 样品后,10 V/cm(恒压)条件下电泳1小时左右,此时应每隔30分钟混匀电泳槽中的电泳液一次。
7.电泳结束后,将凝胶在DEPC处理水中浸泡15分钟,除去凝胶中的甲醛。
8.使用DEPC处理水制备的EtBr(5 μg/ml)染色2 ~ 3分钟。用DEPC处理水脱色30分钟,再换水脱色30分钟后成像观察。如果背景偏高时可以进一步将凝胶脱色。
* RL6,000; RL10,000使用3 g琼脂糖胶粉,RL1,000使用6 g琼脂糖胶粉。
注意:甲醛凝胶用EtBr染色较为困难,即使RNA样品染上了明显的条带也会带来较高的背景。因此,应控制凝胶在染色剂中的浸泡时间小于5分钟,以降低背景。

Note使用注意
1.RNA极易分解,应严格防止核酸分解酶的混入。实验操作时应带手套,实验的仪器及溶液应经DEPC处理。操作不严禁会造成RNA降解,导致RNA Marker中的条带不清晰或不完整。
2.RNA Marker中的RNA为单链线性RNA,因此,当进行体外转录得到的RNA、或经提取得到的mRNA等单链线性RNA电泳时,可使用本制品作为分子量大小的参照标准,但对于Total RNA, 本Marker只能作为定性参照标准。
3.若脱色后观察不到Marker的条带,可能是由于胶被染上了较高的背景,此时可以进行反复脱色后再进行观察。

作者:编辑

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