欢迎来访Www.Ggene.Cn,基因时代为生命科学提供源动力!

网站地图帮助中心

二级
导航

印迹转移电泳

来源:未知 作者:无城 人气: 发布时间:2009-08-20
摘要:生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的 DNA 进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作, 1975 年, Southren 创造了将 DNA 区带原位转移到硝酸基纤维素膜( NC 膜)上,再进行杂交的方法,被称为 Southren 印迹法。随后, Alwine 等将类

生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southren创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southren印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Northern印迹,1979Towbin等设计了将蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜的装置,将蛋白质转移到膜上,再与相应的抗体等配体反应,被戏称为Western印迹,这种装置将膜和凝胶、滤纸等制成夹心饼干状,用低电压高电流电泳完成转移。1982Reinhart等用电转移法将等电聚焦后的蛋白质区带从凝胶转移到特定膜上,称Eastern印迹。
目前国内外有多种核酸、蛋白质印迹转移的电泳装置出售,使印迹转移速度快效率高、重复性好,应用更加广泛。聚丙烯酰胺凝胶也可用于印迹转移电泳,但转移蛋白质时,凝胶中不可含有SDS、尿素等变性剂。用于转移电泳的支持膜亦有多种选择,近些年用尼龙膜较多,因为尼龙膜机械性能好,烘烤不变脆,使用时比硝酸纤维素膜更方便。
    
进行印迹转移电泳时,要注意缓冲液的离子强度要低,pH要远离pI,使蛋白质带有较多电荷,一般用稳定性较好的Tris-缓冲体系。还要注意凝胶与支持膜之间有能有气泡。适当提高电压或电流可以提高转移速度,但亦会增加热效应,故电压或电流不可过高。

作者:无城

Copyright 2008-2015 Powered By Ggene.Cn.
鄂ICP备15005758号-1

声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载或引用的作品侵犯了您的权利,请通知我们,我们会及时删除!