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电泳概述

来源:未知 作者:无城 人气: 发布时间:2009-08-20
摘要:电泳是在溶剂中通过电场转移带电分子,任何带电的离子或者基团放置在电场中都将会迁移。除非在它们的等电点,大多数生物聚合物在任何pH值时都带有净电荷,它们将会以与电荷密度成比例的方式移动。分子在电场中的迁移取决于电场的强度、净电荷、分子的大小和

电泳是在溶剂中通过电场转移带电分子,任何带电的离子或者基团放置在电场中都将会迁移。除非在它们的等电点,大多数生物聚合物在任何pH值时都带有净电荷,它们将会以与电荷密度成比例的方式移动。分子在电场中的迁移取决于电场的强度、净电荷、分子的大小和形状、离子强度、粘度和分子移动介质的温度。作为一种分析工具,电泳简单、快速,并且具有高灵敏度。用来研究单一、带电荷的分子的特性,也用来作为一种分离技术。

支持基质

最常用的支持介质是聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶。它们作为多孔介质起作用,类似于一个筛子,延迟和阻碍大分子的运动,而允许小分子的自由地移动。过滤分子的范围最终取决于胶孔大小和迁移分子大小的接近程度。琼脂糖有一个相对较大的孔径,用来分离大分子例如核酸、大蛋白和蛋白复合物,聚丙烯酰胺形成孔径较小的胶,适合于分离大多数蛋白和小片段核酸。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)

  聚丙烯酰胺胶通过丙烯酰胺单体聚合成长链,同时通过双功能化合物例如甲叉双丙烯酰胺对这些长链进行交联,丙烯酰胺的浓度对任何凝胶有效孔径的大小都有显著的影响――浓度越高,孔径越小,反之亦然。因而,选择合适的丙烯酰胺浓度是最佳分离蛋白组分的关键。

等电聚焦和2D电泳

蛋白的等电点(pI)是蛋白净电荷为零时的pH值。如果将蛋白置于pH值高于它的pI的溶液中时,其总的净电荷为负电荷,在电场中向阳极(+)移动。低于pI时,蛋白带正电荷,向阴极(-)移动。等电聚焦(IEF)是一种电泳技术,根据蛋白的等电点,按照连续的pH梯度分离蛋白。所有的蛋白均为两性化合物,它们的净电荷取决于局部的pH值。IEF后,样品能够在PAGE胶上根据分子量的大小进一步分离。2-D电泳可以完成样品高分辨率分离,以进行随后的分析。 ZOOM® Strip pH 4-7% and NuPAGE® Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM® Gel

琼脂糖胶电泳

0.8% E-Gel® 凝胶电泳是用来分析和鉴定DNA片段的标准方法。不象蛋白,绝大多数的蛋白大小在3-200KD之间,目的核酸片段的大小可能在3-10,000KD之间变化,因而没有单一的电泳介质或者基质能够为正在研究的全部大小范围的DNA分子提供最佳的分辨率。另外,聚丙烯酰胺可以长度大约达到3,000bp的单链和双链核酸分子提供优良的分辨率和上样能力。

 

作者:无城

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