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DNA电泳带型分析

来源:未知 作者:无城 人气: 发布时间:2011-11-05
摘要:DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,我们对DNA带型做了相应的分析。 带型 原因分析 解决办法 弱带或无带 上样的DNA量不够 增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比 琼脂 糖电泳灵敏度稍高 DNA降解 避免DNA

DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,我们对DNA带型做了相应的分析。

带型
原因分析
解决办法
弱带或无带
上样的DNA量不够
增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高
DNA降解
避免DNA的核酸酶污染
电泳时间过长,DNA跑出
减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
EB染色的DNA,紫外光源不合适
应用短波长(254nm),增强紫外灯灵敏度
DNA带缺失
小DNA带走出凝胶
减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
巨大DNA链,凝胶电泳不合适
在脉冲凝胶电泳上分析
DNA带模糊
DNA降解
避免核酸酶污染
DNA上样量过多
减少凝胶中DNA上样量
所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
DNA样含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
DNA变性
电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移
对于λ/Hind III片段COS位点复性
电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟
电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力
DNA变性
以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳

作者:无城

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