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基因重组的方法汇总

来源:未知 作者:无城 人气: 发布时间:2011-01-02
摘要:分子克隆实验已经是现代生物学实验室所必备的常规实验技能,回顾基因重组技术的发展历程到现在,基因重组技术也在不断的更新与完善,以下罗列就是当今普遍被人们所采用的基因重组的方法: A:经典克隆方法: 利用传统的酶切连接方法,将PCR或entry clone的目

分子克隆实验已经是现代生物学实验室所必备的常规实验技能,回顾基因重组技术的发展历程到现在,基因重组技术也在不断的更新与完善,以下罗列就是当今普遍被人们所采用的基因重组的方法:
A:经典克隆方法:
利用传统的酶切连接方法,将PCR或entry clone的目的基因片段酶切并连接到相同酶切的目的载体上,以此重组子转化并筛出阳性克隆的方法,这种方法是较通用并常规的方法,缺点是过程较为繁琐,对于某些片段失败率较高。
B:T载体克隆方法:
利用普通Taq在催化DNA聚合反应的时候会在子链末端额外添加一个A的特性,将PCR产物直接连接进特制的末端突出T碱基的线性载体,这是高通量构建entry clone一个便捷的办法,缺点是非定向克隆,也缺乏保守性。
C:TOP克隆技术:
TOPO克隆技术应用的是来自牛痘病毒的拓扑异构酶,基于该酶具有快速解旋作用、识别5’-CCCTT-3’或5’-TCCTT-3’、具有限制性内切酶和连接酶的功能、不需要外界提供能量、在反应开始的1~2分钟内即可完成80%的反应的特点,将目的基因快速连接到目的载体上。缺点是克隆超过3kb的片段是较为困难。
D:GATEWAY技术:
Gateway克隆技术是invitrogen的专利,基于lambda噬菌体的位点特异性重组反应,在目的片段两端添加重组位点,将PCR产物与含重组位点的目的载体混合重组反应便可直接转化筛选重组克隆,与经典克隆多个步骤相比,该方法只需一步生化反应便能达到目的,是高通量克隆基因的好方法,缺点是通用性不如经典克隆强,对于本身含有重组类似或保守序列的片段或结构复杂的片段应用此法可能会受影响。

作者:无城

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