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Gateway技术进行克隆和表达(4)

来源:生物通 作者:无城 人气: 发布时间:2016-08-12
摘要:除了在酵母中表达蛋白,现在用于研究蛋白-蛋白相互作用的 ProQuest 酵母双杂交系统也是 Gateway- 改造过的(表 7 )。这种双杂交系统允许您: 通过重组反应转移目的基因到 bait 载体或 prey 载体 使用基于 GAL4 转

    除了在酵母中表达蛋白,现在用于研究蛋白-蛋白相互作用的ProQuest™酵母双杂交系统也是Gateway™-改造过的(表7)。这种双杂交系统允许您:

  • 通过重组反应转移目的基因到bait载体或prey载体

  • 使用基于GAL4转录因子重建系统确定相互作用

  • 筛选完整文库或单一克隆

  • 通过提供低拷贝数质粒,具有独立启动子的三种报告基因,阳性和阴性对照,及一组扩展的酵母对照菌株降低假阳性率。

  • 快速转移DNA序列进其它系统进行多种应用

7-ProQuest™双杂交系统

产品 目录号 组成 描述
ProQuest™Two- HybridSystem with Gateway·Technology 10835-031 系统包括:
pEXP-AD502(未酶切)*
pDEST™32*
pDEST™22*
pDBLeu
· 确定两个蛋白之间相互作用的完全酵母系统
· 构建cDNA或基因组文库,确定与bait蛋白相互作用的蛋白
· 构建bait 蛋白
· 为第二个已知目的基因构建prey 蛋白
· 使用传统的方法构建bait 蛋白
pEXP-AD502 Not I-Sal I Cut 12211-017 GAL4 AD
ADH
启动子
· 进行cDNA或基因组文库定向克隆的激活结构域融合载体
· 组成型中等强度启动子
· 构建cDNA或基因组文库,确定与bait蛋白相互作用的蛋白

* 3个载体全部是Gateway™-改造过的,而且具有att重组位点。

昆虫细胞表达
    昆虫可以提供重组蛋白高水平、可溶性的表达。由于昆虫细胞是较高等的真核细胞,它可以提供很多哺乳动物的翻译后修饰及悬浮状态下生长的优势。由于杆状病毒和果蝇表达系统(DES®·)的改进,蛋白在昆虫细胞中表达已经大大简化。Invitrogen Gateway™昆虫表达目的载体允许您在您选择的昆虫系统中生产蛋白,并且获得您想要的表达结果。

    Bac-to- Bac®杆状病毒表达系统通过应用与bacmid的体内重组,简化了杆状病毒的表达。这将允许您快速、简便地生产可以在昆虫细胞中表达的重组杆状病毒载体。目前有3Gateway™目的载体可以满足Bac-to- Bac®杆状病毒表达系统的应用。这些载体允许裂解病毒系统中多角体(polyhedron)启动子控制下的天然蛋白、6xHis融合蛋白或GST融合蛋白的表达。

    果蝇表达系统(DES®)允许在果蝇S2细胞中进行非裂解稳定或瞬时重组蛋白的表达。DES®使用简单的载体及直接的转染方法,然而却生产高水平的重组蛋白。最早自转染后两天就能够观察到瞬时表达,而仅仅两周就可以建立稳定的多克隆细胞系。我们提供的产品正在不断的扩展。如需要广泛的信息资源,请联系技术服务或登录www.invitrogen.com/gateway

8- Gateway™目的载体

载体名称 目录号 特点 优点
杆状病毒
pDEST™8 11804-010 polyhedrin 启动子,无标签(天然蛋白) · Bac-to- Bac®系统高水平表达
· 快速、容易生产重组杆状病毒
· ProBond™树脂快速纯化(pDEST™10*
· 简单的柱纯化(pDEST™20*
pDEST™10* 11806-015 polyhedrin 启动子,N-6xHis
pDEST™20* 11807-013 polyhedrin 启动子,N-GST
稳定昆虫表达
pMT-DEST48 12282-018 金属硫蛋白启动子C-V5-6xHis · DES®系统金属诱导的高水平表达
· V5表位检测融合蛋白
· 6xHis 提供ProBond™树脂快速纯化
· 质粒-基础的系统提供昆虫细胞中异源蛋白的表达
pIB/V5-His-DEST 12250-018 OpIE2启动子GP64启动子 C-V5-6xHis · 与两侧加有attL位点的Gateway™入门载体有效重组
· 快速筛选稳定细胞系
· 目的基因组成性表达
· 表达bsd抗性基因

 

6xHis标签来自Qiagen授权。

哺乳动物表达

作者:无城

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