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RT-PCR内参的种类及各自的应用范围

来源:未知 作者:编辑 人气: 发布时间:2016-09-30
摘要:请教RT-PCR内参的种类及各自的应用范围?特别是GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)和actin这两个内参照物。欢迎介绍有关的书目或资料。谢谢! 答:PCR基因定量技术 基本原理同PCR定性技术,方法上计有终点稀释法、外参照法、荧光PCR、PCR~ELISA等。但任何一种定量pcr技

请教RT-PCR内参的种类及各自的应用范围?特别是GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)和actin这两个内参照物。欢迎介绍有关的书目或资料。谢谢!

答:PCR基因定量技术

基本原理同PCR定性技术,方法上计有终点稀释法、外参照法、荧光PCR、PCR~ELISA等。但任何一种定量pcr技术,如果不设置内参照就必然缺乏精确性,因此,竞争PCR技术被广泛采用。竞争PCR的基本原理则是在定性PCR的基础上,在扩增反应管内加入了一种称之为内参照的竞争模板,可以与野生模板即目的片段等效地被扩增。内参照是决定分析系统是否可靠和稳定的关键因素。理想内参照的条件:

第一,保证竞争模板与野生模板在PCR过程中扩增效率相同或相近。内参照序列最好与目的片段等长,引物退火区的序列与野生模板相同。

第二,扩增产物中的内参照和目的片段可以在扩增过程中或结束后至少通过一种手段被区分和定量。PCR定量检测HBV DNA的灵敏度比分子杂交法高1000倍以上。

GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)和actin这两个内参照物比较常用。

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