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细菌的芽孢染色和鞭毛染色

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:某些细菌在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢。芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌体中脱落出来。芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚,所以不易着色,通常多采用着色力强的染色剂和用
某些细菌在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢。芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌体中脱落出来。芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚,所以不易着色,通常多采用着色力强的染色剂和用加热等手段促使芽孢着色,并利用复染的方法对比原细菌菌体和芽孢,才易于在显微镜下看到它们。但是,若用简单染色法使菌体着色而芽孢无色也可以衬托出芽孢的形状、大小和位置。
 
【实验目的】
掌握细菌芽孢染色的方法。
 
【实验原理】
细菌的芽孢含水量少,脂肪含量高,芽孢壁较厚,对染料的透性差,不易着色,但是一旦着色又难以脱色。
通常,芽孢染色采用弱碱性染料孔雀绿在加热的条件下进行。染色完毕,用蒸馏水冲洗。因孔雀绿是弱碱性染料,与菌体结合力较差,因此易被水冲洗掉,而进入芽孢的孔雀绿却难于溶出。水洗后,再用一种呈红色的碱性染料复染,使菌体和芽孢呈现不同颜色。
 
【实验材料、药品及器具】
1、菌种   枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis
          巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium
2、染液   孔雀绿染液
          藏花红染液
3、器皿   显微镜、酒精灯、镊子、洗净的载玻片4片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、玻璃红、洗瓶装蒸馏水、接种环。
 
【实验步骤】
1、取培养24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分别涂片、干燥、固定。
2、在涂片部分用吸水纸条盖住,然后向纸条滴加孔雀绿液至饱和。
3、将涂片逐渐加热至微冒蒸汽并不时添加染液以防止吸水纸条干燥。染色2-8分钟。
4、除去吸水纸条,用蒸馏水轻轻冲洗掉多余染液。
5、用藏花红染液复染30~60S。
6、水洗,风干或烘干后镜检。
 
【实验结果】
1、首先用低倍镜,再用油浸镜检查制片,注意芽孢的颜色和菌体的颜色。
2、绘制芽孢图。注意芽孢在菌体内的位置、大小和形状并绘制游离芽孢形态图。
【思考题】
1、为什么经孔雀绿染色后,水洗再复染红色染液只能染上菌体?
2、用革兰氏染色能否看到芽孢,为什么?
 
  细菌鞭毛染色
 
许多细菌自细胞内长出一至许多根细丝状附属物称为鞭毛。鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动。鞭毛细长透明,其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观察。但是在不染色情况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在。
 
【实验目的】
学习并掌握鞭毛染色的原理和方法。
 
【实验原理】
细菌的鞭毛非常纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观察。本实验采用特殊染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。染色后,即可利用普通光学显微镜进行观察。
 
【实验材料、药品及器具】
1、菌种   培养18-24h的菌种
          大肠杆菌(Escherichia coli
          普通变形杆菌(Proteus Vulgaris
          荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens
2、染色液  鞭毛染色液甲
           鞭毛染色液乙(实验前配好的新鲜染液)
3、器皿  显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、干净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支。
 
【实验步骤】
1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min使细菌自己慢慢游入水中并充分舒展其鞭毛,使水呈轻度混浊。
2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定。切忌用火焰烘干。
3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min。
4、用蒸馏水轻轻冲洗。
5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热。冲洗多余的染液。
6、制片干后检查。
 
【实验结果】
1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和形状。
2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图。
 
【思考题】
1、菌种的培养时间与鞭毛染色有什么关系?
2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和形状?
3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区别?为什么?
 
作者:无城

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