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实验常用试剂、缓冲液的配制方法

来源:丁香园 作者:无城 人气: 发布时间:2012-02-05
摘要:实验室常用缓冲液+常用引物序列汇总 实验室常用缓冲液+常用引物序列汇总 下载 1 、 1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)□配制量 1L □配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 按下
实验室常用缓冲液+常用引物序列汇总

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1M Tris-HCl            □组份浓度 1 M Tris-HCl
(pH7.4,7.6,8.0)   □配制量 1L
    □配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
                         2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                         3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
                                                        pH值                      浓HCl 
                                                        7.4                         约70mL
                                                        7.6                         约60mL
                                                        8.0                         约42mL
                        4. 将溶解定容至1L。 
                       5. 高温高压灭菌后,室温保存。                           
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 
21.5 M Tris-HCl    □组份浓度 1.5 M Tris-HCl
    (pH8.8)            □配制量 1L
        □配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
                           2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                           3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
                            4. 将溶液定容至1L。
                          5. 高温高压灭菌后,室温保存。 
       注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 
310×TE Buffer        □组份浓度 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
(pH 7.4,7.6,8.0)  □配制量 1L
 □配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                              1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL
                             500 mM EDTA(pH8.0) 20mL
                      2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
                     3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
                     4. 室温保存。
43 M 醋酸钠     □组份浓度 3 M 醋酸钠
    (pH5.2)          □配制量 100mL
    □配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
                          2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
                        3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
                         4. 高温高压灭菌后,室温保存。
5PBS Buffer          □组份浓度 137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4
                                □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                      NaCl                      8 g
                                                      KCl                      0.2g
                                                      Na2HPO4          1.42 g
                                                      KH2PO4             0.27g
       2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
      3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。 
       4. 高温高压灭菌后,室温保存。
       注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
610 M醋酸铵         □组份浓度 10 M醋酸铵
                                □配制量 100mL
   □配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
                        2.加去离子水将溶液定容至100mL。
                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
                         4.密封瓶口于室温保存。 
       注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7Tris- HCl平衡苯酚    □配置方法
       1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  
       2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 
       3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下: 
          ① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 
          ② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 
          ③ 加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。  
          ④ 重复操作步骤③。 
          ⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。  
          ⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。 
          ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 
          ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇  □配置方法
        1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白(25 :24 :1) 质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 
        2. 配置方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 

910%(W/VSDS   □组份浓度 10%(W/V)SDS
                                   □配制量 100mL
    □配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。
                        2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
                           3. 将溶液定容至100mL后,室温保存。
102 N NaOH           □组份浓度 2N NaOH
                                 □配制量 100mL 
    □配置方法
1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 
      2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
     3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。
     4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
112.5 N HCl         □组份浓度 2.5 N HCl
                                  □配制量 100mL
作者:无城

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