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石蜡切片法

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:目的要求 了解石蜡切片法的整个过程,初步掌撑石蜡切片技术。 材料及用具 (一)材料:选择适用于石蜡切片的根,茎、叶、芽、子房、花药做材料。 (二)用具:恒温箱、弓字板、镊子、刀片、解剖刀,切片机、切片刀,毛笔、牛皮纸、染色缸、培养皿、石蜡熔点(5154
目的要求
了解石蜡切片法的整个过程,初步掌撑石蜡切片技术。
材料及用具
(一)材料:选择适用于石蜡切片的根,茎、叶、芽、子房、花药做材料。
(二)用具:恒温箱、弓字板、镊子、刀片、解剖刀,切片机、切片刀,毛笔、牛皮纸、染色缸、培养皿、石蜡熔点(51—54C)、载玻片、盖玻片。
(三)药品:固定剂、各级浓度酒精、二甲苯、l%番红水溶液、半自动显微镜技术0.2%~0.5%亮绿精液、0.5%苏木清液、2%铁明矾液,粘贴剂,中性树胶等。
操作过程
1、取材:切取新鲜材料数段,每段3-4毫米:
2、固定:用于观察组织的材料,入FAA液固定24小时,用于观察细胞分裂的材料,入桑弗利斯固定24小时;
3、冲洗:用FAA固定的材料,用70%酒精洗3次,每次2小时,用桑弗利斯固定的材料,用流水冲洗24小时,然后经30%、50%、70%,的酒精中脱水,每级半小时至1时。
4、脱水:材料经80%、95%、100%、纯酒糟中,继续脱水,每级半小时至1小时。
5、透明:入纯酒精+二甲苯+二甲苯,每级半小时至2小时。
6、浸蜡:已透明材料→二甲苯+石蜡,在35℃左右的室温中浸蜡1-2天,然后移入纯石蜡中(放入56℃恒温箱内)每隔半小时更换纯蜡一次,约换纯虹2-3次,即可进行包埋。
7、包埋:先用牛皮纸折成适当大小的纸盘,放在用酒精灯加热的弓字板上,然后从温箱中取出盛有石蜡和材料的小杯,放在弓字板上,同时从温箱中取出已熔解的石蜡,迅速倒入纸盒里,并将石蜡杯放回温箱,将熔解的石蜡保存备用,再用烤热的镊子将材料从小杯中移入纸盒内,并使材料间隔开来,排列整齐,然后将纸盒轻轻放入冷水中,待表面石蜡凝结后,将纸盒沉入水中,约20分钟后,取出撕去纸盒,将蜡块保存。
8、切片:先将蜡块沿两个材料之间切开,并将带材料的小蜡块,根据切片的方向,修整成矩形,然后用荡片器将小蜡块固着在小木块上,用旋转切片机将蜡块切成连续的蜡带,其厚度为10-12微米,将蜡带放在黑色蜡光纸上,使蜡带正面朝上。
9、粘片:在洁净的载玻片上,滴上一层粘片剂,将分割的蜡片,浮载于粘片剂上(使反面朝下),置温台上加热,使蜡片平展,然后吸去多余的粘片剂,将蜡片排列整齐,把载玻片平放木板上,放入30℃的温箱中烘片2小时。
10、染色:任选一种进行。
甲:用番红与亮绿染色法
(1)切片入二甲苯中,约10分钟左右,使石蜡完全溶去;
(2)入纯酒精与二甲苯等量混合液中5分钟:
(3)经100%,95%,70%,50%酒精下降到水;
(4)用I%番红水溶液染色2-12小时:
(5)用水洗去多余染液;
 (6)脱水:经50%酒精一70%酒精,各5分钟:
 (7)用0.2%亮绿染色2-3分钟;
作者:无城

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