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植物染色体标本的制备与观察

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:实验目的 学习植物染色体标本的制备技术,掌握染色体的计数方法,了解染色体的生物学意义. 实验用品 一、材料 大麦、黑麦或小麦种子 二、试剂 1、Camoy固定液 2、O.1%秋水仙素溶液 3、lmol/L HCl 4、Schiff试剂 5、亚硫酸水溶液(漂洗液) 6、混合酶液(纤维
实验目的
学习植物染色体标本的制备技术,掌握染色体的计数方法,了解染色体的生物学意义.
实验用品
一、材料
大麦、黑麦或小麦种子
二、试剂
1、Camoy固定液
2、O.1%秋水仙素溶液
3、lmol/L HCl
4、Schiff试剂
5、亚硫酸水溶液(漂洗液)
6、混合酶液(纤维素酶,果胶酶各1%--2%)
7、Carbor fuchsin(卡宝晶红)染液
配方I:
原液A:称取38碱性晶红,溶于100ml 70%酒精中(此液可无限期保存)。
原液:B取10mi原液A,加入90ml 115%石炭酸(苯酚)水溶液(两周内使用)。
染色液:55ml原液B加6ml冰醋酸和6ml 37%甲醛(此液适用于植物原生质体培养中细胞核和按分裂的染色).
配方II:
取配方I中的染色液2--10ml,加90—98ml45%醋酸和1.8g山梨醇(此液适用于核和染色体的一般形态观察,具有广泛的适用性)。
实验方法
I、取材:将大麦、黑麦或小麦种子培养在培养[阻内的漫滤纸上℃下发芽,特胚根长达I--2cm时,切取0.5cm长的根尖部分。
2、预处理;将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中,室温下处理3--4h。也可把根尖浸入小烧杯内的自来水中,杯内加冰两小块,置0--4℃冰箱内低温处理24h左右。
3、固定:取出根尖,投入Carnoy液中固定2-24h,换入70%酒精,暂时保存。
4、水解:把根尖投入预热的58-60℃ 1mol/L热HCI中,恒温条件下水解14-15min。
5、染色:倒去热HCl,滴加Schiff试剂(五色晶红)少许,染色0.5--1h(也可在冰箱内染色12--24h)。
6、漂洗:吸去Schiff试剂,用漂洗液换洗2--3次,每次1--2min.
7、酶解:在载玻片上切取根尖着色深的部分,浸入小酒杯内1--2滴混合酶液中,室温下酶解40min左右或在28℃温箱中酶解20min左右。
 8、洗涤:吸去酶液,加蒸馏水,用吸管换洗几次,除去残留酶液后加入45%醋酸。
9、压片:用吸管从醋酸中吸取材料,置干净载玻片上,材料周围保留半滴45%醋酸,盖上盖玻片。其上放一片吸水纸.左手揩压住吸水纸的左边。右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去,再用铅笔擦头从盖片上轻轻敲打,使细胞均匀散开。
10、镜检;把压好的片于放显微镜下,先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少,再检查分裂中期细胞中的染色体是否完全敞开.如若染色体分散不好而难以分辨和计数。可取下片子,平放桌面上,用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压  力,如果操作细心,用力适度,便可很容易得到染色分散良好的压力标本,供观察,计数和照相用。
11、封存:压好的片子如果来不及观察或照相,必须进行暂时封存。封存时
先在盖玻片四周各放麦粒大石蜡一块,然后用烧热的解剖针迅速熔化石蜡,使盖片四周严密封闭.封好的片于可放培养皿内湿滤纸上的火柴棒支架上,盖上培养皿,可放冰箱内保存2—3天.
Schiff试剂染色效果不够理想的材料,可于水解后改用Cart)orfuchsin染色(5-5rain)。由于Carbor fuchsin具有染色快、着色深以及适用性广等特点,因此多数植物的根尖、幼芽、花药以及培养的细胞或愈伤组织,经Carbor fuchsin染色,都能得到良好的结果。
作  业
验变压片标本1-2张,要求细胞分散均匀,形态完整,中期分裂相中染色体数目齐全,互不重叠能够进行准确计数和照相。


 

作者:无城

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