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植物细胞骨架的光学显微镜观察

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:一、实验目的 学习用光用显微镜观察植物细胞内骨架的基本方法 了解植物细胞的骨架的结构特征. 二、实验原理 当用适当浓度的Triton X-100处理时,可将细胞内蛋白质破坏,但细胞内骨架系统的蛋白质却被保存,后者有考马斯亮蓝R250染色,可在光学是显微镜下观
一、实验目的
学习用光用显微镜观察植物细胞内骨架的基本方法
了解植物细胞的骨架的结构特征.
二、实验原理
 当用适当浓度的Triton X-100处理时,可将细胞内蛋白质破坏,但细胞内骨架系统的蛋白质却被保存,后者有考马斯亮蓝R250染色,可在光学是显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验用品
(一)材料
洋葱鳞茎
(二)器材
显微镜,5ml烧杯,胶头滴管,容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
试剂
(1)M-缓冲液:50mmol/L味唑、50mmol/L KCJ、0.5mmol/LMgCl2、mmol/L EGTA 、0.1mmol/LEDTA、1 mmol/L巯基乙醇。
(2)6mmol/L pH6.8磷酸缓冲液,用NaHC03调pH)。
(3)1%TritonX-1OO,用M-缓冲液配制。
(4)O.2%考马斯亮蓝R250,其溶剂是:甲醇46.5ml,冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml。
(5)3%戊二醛,用磷酸缓冲液配。
(6)50%、70%、95%乙醇。
(7)叔丁醇。
(8)正丁醇。
(9)二甲苯。
(10)中性树胶。
四、实验方法
(1)撕取洋葱鳞茎内的表皮缅胞(约1cm2大小若干片)置于装有pH6.8磷酸缓冲液的5ml烧杯中,使其下觉。
(2)吸去磷酸缓冲液,用1%Triton X-100处理20-30分钟。
(3)吸去Triton X-100,用M-缓冲液洗三次,每次10分钟。
(4)3%二醛固定0.5--1小时.
(5)pH6.8磷酸缓冲液洗三次,每次10分钟。
(6)0.2%考马斯亮蓝R250染色20--30分钟,
(7)用蒸馏水洗1--2次,细胞置于载玻片上,加盖玻片,于普通光学显微镜下观察。
(8)如观察装什效果好,可制作成永久装片.
在样品的5mt烧杯中,按顺序通过如下药物:50%乙醇、70%乙醇,90%乙醇、1/295%7醇+1/2叔丁醇、叔丁醇(每级5--10分钟);或正丁醇→二甲苯→二甲苯→二甲苯(每级5--10分钟),然后捞取样品,平展于载玻片上,经镜检,效果好,可加一滴中性树胶,盖上盖玻片。
作业
绘一个洋葱磷叶表皮细胞的细胞骨架图
 
作者:无城

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