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PSA反应法显示多糖

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:一、实验目的 掌握PAS(高碘酸-希夫试剂)反应显示多糖的方法了,了解多糖在细胞内的分布及其特性。 二、实验原理 此法的基本原理是利用高碘酸(氧化剂)破坏多糖分子中的C-C健,变为醛基,此醛基与希夫试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,生成一种紫红邑的反应产物
一、实验目的
掌握PAS(高碘酸-希夫试剂)反应显示多糖的方法了,了解多糖在细胞内的分布及其特性。
二、实验原理
    此法的基本原理是利用高碘酸(氧化剂)破坏多糖分子中的C-C健,变为醛基,此醛基与希夫试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,生成一种紫红邑的反应产物。这一过程称为PAS反应。
表现PAS阳性反应的物质,除多糖外,还有糖蛋白及粘蛋白等,后二者是糖类化合物与蛋白质的络合物.上述成分与高碘酸—希犬试剂反应即生成正反应的红色产物。其生成物可得到定性的定位测定。
三、实验方法
方法
1、试剂的配制
(1)0.5--0.8%高碘酸(HIO4)水溶液
(2)希夫试剂
将1克碱性晶红溶于200毫升沸腾的蒸馏水中,摇动5--10分钟,冷却到50℃时过滤.向滤液中加入1NHCl20毫升,冷至25℃,加2克偏亚硫酸钾(或钠盐),摇匀,静置暗处过液.加活性炭2克,摇动2--3分钟,用滤纸将溶液过滤于棕色瓶中.滤液应该是无色或淡黄色,若呈红色则不能用。用前将染液升到室温。根据我们的经验:使偏亚硫酸钾2--3倍于碱性品红,可增强希夫试剂活力。在提高偏亚硫酸钾用量的情况下,即可使碱性晶红变成无色,不用活性炭去色过滤。
(3)洗涤液——偏亚硫酸钾(或钠)溶液
10%偏亚硫酸钾    5毫升
INHCl             5毫升
蒸馏水            90毫升
临川时将三者混合,使用新鲜混合液。
2、实验程序
(1)切片脱蜡后,经各纯浓度酒精下降至蒸馏水
(2)流水冲洗15--30分钟.
(3)0.5—0.8%高碘酸溶液处理10分钟.
(4)流水洗涤5--10分钟,蒸馏水过一下.
(5)移入希夫试剂中20--30分钟.
(6)用偏亚硫酸钾溶液洗三次,每次2--3分钟。
(7)流水洗涤10--15分钟,并通过蒸馏水5分钟.
(8)按常规通过各级乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。
对照片:切片通过第二步后,分别经以下处理.然后与正反应并列进行。
a)1%淀粉酶,25℃处理1小时.
b)10%醋酸酐的吡啶溶液中,室温下4-2小时,
c)用唾液37℃下消化处理30分钟,更换一次。
3、结果
淀粉粒、纤维素细胞壁及细胞内的一些中性粘多糖、粘蛋白及糖蛋白被染紫色。
作业
交PAS反应玻片一张。
作者:无城

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