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DNA的FeulSeH染色法

来源:湖南农业大学 作者:无城 人气: 发布时间:2010-11-09
摘要:实验目的 学习DNA的Feulgen染色方法,了解反应原理。 实验原理 DNA经弱酸(1mol/LHCI)水解,其上的嘌岭碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色晶红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA
实验目的
学习DNA的—Feulgen染色方法,了解反应原理。
实验原理
DNA经弱酸(1mol/LHCI)水解,其上的嘌岭碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色晶红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醒基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应,从而证明了Feulgen反应的专一性.
实验用品
一、材料
1、Camoy液固定的鼠肝石蜡切片。
2、Camoy液固定的洋葱根尖或根豆根尖切片。
二、试剂
1、Camoy固定液
3份95%酒精加入1份冰醋酸。
2、l mol/LHCI
取比重1.18的浓HCI82.5ml,加水至100ml。
3、Schiff试剂
先将200mi蒸馏水煮沸,由火上取下,加入碱性品红1g,充分搅拌,有助于溶解.待溶液冷到50℃时。过滤到磨口棕色试剂瓶中。加入1mol/L HCI  20ml,冷却到25℃时加入1g偏亚硫酸钾(K2S2O2)或偏亚硫酸钠(Na2S2O5)充分振荡后盖紧瓶塞,放于暗处过液。次口取出,呈淡黄色或近于无色,加中性活性炭一匙,约0.5g,剧烈振荡1min,过滤后即得无色品红。
4、亚硫酸水溶液(漂白液)
100%偏重亚硫酸钠水溶液5ml,蒸馏水100ml,1mol/L HCI5ml,摇匀,塞紧瓶塞。
5、5%三氯醋酸
6、0.5%固绿酒精溶液(95%酒精溶液)
实验方法
石蜡切片
溶蜡二甲苯I
溶蜡二甲苯II             (3-5min)
1/2纯酒精+2/2二甲苯      (3-5min)
纯酒精I                   (3-5min)
纯酒精II                  (2-3min)
95%酒精                    (2-3min)
83%酒精                    (2-3min)

5%三氯醋酸,90℃,15min
70%酒精(2-3min)
70%酒精                    (2-3min)

对照组
蒸馏水

 

蒸馏水(过一下)
 


 

1mol/L


 

1mol/L HCI               60℃8-15min(水浴或温箱中)
Schiff试剂               (60-90min)
亚硫酸水(I II III)       (各5 min)
流水冲洗                (5-15min)
蒸馏水
0.5%固绿水溶液(复染)  (1min)(此步要快,以免过染)
蒸馏水
70%酒精
83%酒精
95%酒精
纯酒精I 
纯酒精II
纯酒精III
透明二甲苯I
透明二甲苯II
封 面
(贴上标签,注意材料,反应名称,作者姓名及日期)
显微镜下检查:
实验组:细胞核呈现紫红色
核仁及细胞呈现绿色
对照组:由于DNA被提取破坏
所以细胞核无紫红色
作  业
1、验交Feulgen反应制片1张
2、简图表示Feulgen反应的染色结果
3、说明Feulgen反应中设立对照组的必要性。
作者:无城

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