欢迎来访Www.Ggene.Cn,基因时代为生命科学提供源动力!

网站地图帮助中心

二级
导航

流式分析细胞周期Protocol

来源:未知 作者:小编 人气: 发布时间:2009-06-21
摘要:详细的流式分析细胞周期Protocol

一、具体步骤:
1 细胞培养:
取对数生长期的细胞,按1X106/mL以1mL体积接种24孔板或2mL体积接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),在特定的时间后终止培养,进行下一步的实验。(个人体会:细胞的浓度根据自己实验的要求,但根据经验最好总细胞数在1X106以上,如果细胞太少,接下来的漂洗和固定还会损失的,这样上机时有时会出现细胞不够)
2 细胞固定:
离心收集细胞,弃上清,用预冷PBS洗细胞两次,加入预冷70%乙醇,于4℃固定过夜,或-20℃长期固定。(4℃过夜一般隔天就进行检测,如果想推迟几天测,那就保存在-20℃,有资料说-20℃可以保存一个月,个人建议尽量在最短时间内检测,有些实验是在不同时间点上收细胞,这时我就等最后一次固定完了一块测,基本上也多在一周内检测完毕,没有特地去比较保存时间对检测结果的影响)
3 细胞染色:
离心收集细胞,以1mL的PBS洗细胞一次,加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭(PI),100ug/mL RNase A, 0.2% Triton X-100, 4℃避光孵育30分钟。(PI我是直接用PBS配成工作浓度,然后加入细胞沉淀混匀,RNA酶现加,但有时不加发现对实验结果也没太大的影响)
4 流式分析:
以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2-3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

二、给几张自己做的结果让初学者有点感性认识吧:
A. 正常培养条件下的细胞周期;B. 细胞因子饥饿法将细胞同步在G0/G1其;C. 显示G0/G1期前的亚二倍体,代表细胞凋亡。

作者:小编

最火资讯

Copyright 2008-2015 Powered By Ggene.Cn.
鄂ICP备15005758号-1

声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载或引用的作品侵犯了您的权利,请通知我们,我们会及时删除!