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细胞老化致出现小黑点

来源:未知 作者:admin 人气: 发布时间:2009-05-31
摘要:我养的是人血管平滑肌细胞(SMC),传代的时候,先用PBS清洗两次,然后加0.25%胰酶,显微镜下看到细胞收缩变圆了,就加培养基中止消化。用吸管轻轻吹打培养瓶内的培养基,尽量把大部分SMC吹打下来。把SMC液分装到新培养瓶,加新鲜培养基。旧培养瓶也加新鲜培

我养的是人血管平滑肌细胞(SMC),传代的时候,先用PBS清洗两次,然后加0.25%胰酶,显微镜下看到细胞收缩变圆了,就加培养基中止消化。用吸管轻轻吹打培养瓶内的培养基,尽量把大部分SMC吹打下来。把SMC液分装到新培养瓶,加新鲜培养基。旧培养瓶也加新鲜培养瓶,继续培养。(因为旧培养瓶内仍然有未吹打下来的SMC细胞)

但问题是,到了第2天一看,新培养瓶内的SMC虽然都贴壁了,但多出来很多小黑点。这些小黑点有的贴壁,有的悬浮。即使用PBS清洗,第2天又会出现。细胞之后会逐渐出现空泡和颗粒,状态不佳,但生长却无明显减缓。

我本来怀疑是我的新鲜培养基污染了,但这些小黑点是在新培养瓶里面出现,而旧培养瓶则几乎没有。而且,我曾经把出现小黑点的培养瓶内的培养基吸出来,与新鲜培养基混合,在培养箱内培养5天之久,混合物仍不浑浊,小黑点没有明显增加。所以,应该能排除细菌污染。(我所有培养基都没加双抗)

难道这些小黑点是吹打细胞或者是细胞老化凋亡的细胞碎片?

为什么细胞传代后会逐渐出现空泡和颗粒,状态不佳?是我消化过头,还是我不该吹打细胞?

此图是新培养瓶内的SMC,传代后第24小时,10倍物镜。


从楼主所发的图上来看,楼主的细胞的折光性不是很好,请问楼主,在出现小黑点后,您的细胞是否有“变薄”的现象?
如果有的话,根据您的图和您所描述的,您的细胞有可能是老化所致(因为据您所说,您的细胞并无生长减缓和明显死亡、脱落等现象)。其原因有可能是楼主消化过度或是吹打太过用力。
建议楼主用重新复苏细胞(如果还有冻存的细胞的话),如果是原代细胞建议重新取。
如果楼主还想用这批细胞的话,可以试着用PBS洗两次,尽可能的把小黑点都洗掉,然后换用20%的FBS。
祝好运。
"变薄"是指细胞颜色变浅,边缘变模糊么?是有这样的趋势。

换20%的FBS?为什么?
这个细胞后来情况怎么样了?
因为前段时间
我的细胞也出现这种情况
当时把细胞直接扔了,重新复苏
我的细胞也有这种小黑点,听一位师姐说可能是血清的原因,不影响细胞的生长,所以就没有追究原因
我培养过ST细胞也出现这过这种情况,原因是细胞生长不良,可能是营养不良或老化使得细胞出现空泡,黑点。 
 通常经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“,但在37℃环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为微生物之增殖。一般而言,此小黑点应不会影响细胞的生长,但若怀疑此血清的品质,应立即停用,更换另一批号的血清。

作者:admin

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