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细胞传代吹打减少气泡的方法

来源:未知 作者:无城 人气: 发布时间:2009-10-14
摘要:1.有一些细胞可以不用消化液就能够吹打下来。个人认为能不用消化液是最好的。譬如巨噬细胞。我一直维持巨噬细胞,每次传代都不用消化液,吹打的时候我一般会用瓶内未换的剩余旧培养液,这样子比用新的培养基可以减少点泡沫的生成。当然这个一定要求原培养基

1.有一些细胞可以不用消化液就能够吹打下来。个人认为能不用消化液是最好的。譬如巨噬细胞。我一直维持巨噬细胞,每次传代都不用消化液,吹打的时候我一般会用瓶内未换的剩余旧培养液,这样子比用新的培养基可以减少点泡沫的生成。当然这个一定要求原培养基未被污染。

2. 吹打的时候我们都知道要一点挨着一点吹,这样子不会漏掉地方。而我每次都会首先沿着两条对角线的方向吹打,然后再按照横着或者是竖着吹打。这样子就可以比较容易把细胞吹下来,因为首先细胞的各个方向都受力了,而且比较均匀,细胞比较容易下来,而且对细胞形态的维护比较好。

3.对胶头滴管的要求。胶头滴管头部最好是做成弯曲45度角的形状,一般都是自己用止血钳夹住头部在酒精灯上烧弯。我还发现,如果你吹打的时候,滴管的头部边缘如果是和吹打平面平行的话,反而容易产生泡沫,贴在底部吹,也容易产生泡沫,最好是能够有一个角度顺着你吹打的方向和滴管一致。并且稍微远离吹打面,这样滴管内的液体容易流出,阻力会减小,就不会产生那么多的泡沫了。

4.控制你吹打的节奏,急速地吹打会很快地产生泡沫,用力越大,越容易产生。最好是能够把握住自己的力度和节奏,有条不紊的吹打。我的体会是以自己拿滴管用手的轻松程度为准,如果刚吹几下很快就累的话,那就证明是节奏过快。吹完都不累的话那就是太慢力度也不够。我觉得一般在吹完一遍时指头发困会比较好。这样的节奏能够比较快速而且有效地完成。

本人觉得最关键的操作是不要吹打到底。

培养细胞多年,避免气泡产生要注意以下两点:

1 吹打用的培养基不能太少,如果只有1-2mL,气泡难以避免;

2 吸管每次打出液体后立刻深入液面下吸取液体。

在传代的时候,急速的反复吹打肯定容易产生泡沫,这对细胞不利,所以我们要尽量避免。在操作时尽量选用较大口的吸管,吸液时先将吸管内空气排空,再深入液面以下吸液,吹打细胞时,尽量沿着壁吹出液体,操作轻柔,就可最大程度避免泡沫的产生!
 

作者:无城

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